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ELISA吸光度值衰減探究
點(diǎn)擊次數(shù):944 更新時(shí)間:2023-04-20

  在做elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)的時(shí)候,ELISA吸光值一直在衰減這樣的現(xiàn)象。在加完顯色液(購(gòu)買(mǎi))顯色一定時(shí)間后,再加終止液(2M H2SO4,自己配制)后,立即測(cè)試其吸光度值,等過(guò)幾分鐘再測(cè)試吸光度值,發(fā)現(xiàn)兩次測(cè)得的吸光度值發(fā)生衰減。第二次均小于次。并且,加終止液時(shí),從條加到第12條后,測(cè)試發(fā)現(xiàn),吸光度值從1-12條逐級(jí)衰減。前提是這12條酶標(biāo)板都是同一種產(chǎn)品,并且包被相同蛋白。原來(lái)ELISA吸光度值衰減可以這樣巧妙應(yīng)對(duì)。      

  其實(shí)具體的原因也很簡(jiǎn)單,有可能是顯色液的質(zhì)量不夠好。一般情況下,終止反應(yīng)后OD值的下降前期不是很明顯。終止后,吸光度值是會(huì)隨著時(shí)間衰減,所以一般是加完終止液后立即測(cè),這樣比較準(zhǔn)。再次分析12條顯示逐級(jí)遞減的原因看看是否是:

1、 顯色時(shí)間調(diào)整,如果你現(xiàn)在的顯色時(shí)間是10MIN,那調(diào)整到30MIN,再加終止液,觀(guān)察上述現(xiàn)象是否出現(xiàn)。    

2、 終止液中加入少量甘油看下怎么樣。建議您使用RD品牌的ELISA試劑盒,顯色時(shí)間是30分鐘,終止后要求在30分鐘內(nèi)檢測(cè),加入終止液后,在加入終止液后2到3分終內(nèi)檢測(cè),這是OD值相對(duì)比較高。擬合值能達(dá)到四個(gè)9。



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