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腦微血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng)注意事項

點擊次數(shù):1035 發(fā)布時間:2018/11/2
提 供 商: 上海撫生實業(yè)有限公司 資料大小:
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腦微血管內(nèi)皮細胞是血腦屏障的主要組成成分,能夠限制可溶性物質(zhì)和細胞等從血液進入大腦。大腦微血管內(nèi)皮細胞與外周內(nèi)皮細胞相比具有一些相同特性。如:1)腦微血管內(nèi)皮細胞存在許多細胞間緊密連接,產(chǎn)生很高的跨內(nèi)皮阻抗,延遲細胞旁的通量;2)腦微血管內(nèi)皮細胞缺乏內(nèi)皮細胞的窗孔結(jié)構(gòu),其液相物質(zhì)胞飲水平較低;3)腦微血管內(nèi)皮細胞具有不對稱定位酶和載體介導(dǎo)轉(zhuǎn)運系統(tǒng),從而產(chǎn)生 “兩極分化”的表現(xiàn)型。 與外周內(nèi)皮細胞相同,大腦微血管內(nèi)皮細胞表面表達細胞粘附分子,調(diào)控白細胞進入大腦。由于微血管內(nèi)皮細胞的器官特異性,內(nèi)皮細胞通常取源于疾病研究的相關(guān)組織。
人腦微血管內(nèi)皮細胞(HBMEC)提取于人腦組織,提取純化之后立即凍存。每管含有細胞數(shù) >5×105 cells/ml,此細胞通過vWF/Factor VIII 和CD31 (P-CAM)免疫熒光染色驗證,經(jīng)測試不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

腦微血管內(nèi)皮細胞, 細胞培養(yǎng)注意事項:

1、實驗進行前,無菌室及無菌操作臺(laminarflow)以紫外燈照射30-60分鐘滅菌,以70%ethanol擦拭無菌操作抬面,并開啟無菌操作臺風(fēng)扇運轉(zhuǎn)10分鐘后,才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株,且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基,以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后,將實驗物品帶出工作臺,以70%ethanol擦拭無菌操作抬面。操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺運轉(zhuǎn)10分鐘以上后,再進行下一個細胞株之操作。

2、無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞,必要物品,例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時放置,其它實驗用品用完即應(yīng)移出,以利于氣流之流通。實驗用品以70%ethanol擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作應(yīng)在抬面之中央無菌區(qū)域,勿在邊緣之非無菌區(qū)域操作。

3、小心取用無菌之實驗物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45°角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。

4、工作人員應(yīng)注意自身之安全,須穿戴實驗衣及手套后才進行實驗。對于來自人類或是病毒感染之細胞株應(yīng)特別小心操作,并選擇適當(dāng)?shù)燃壷疅o菌操作臺(至少ClassⅡ)。操作過程中,應(yīng)避免引起aerosol之產(chǎn)生,小心毒性藥品,例如DMSO及TPA等,并避免尖銳針頭之傷害等。

5、定期檢測下列項目:5.1CO2鋼瓶之CO2壓力5.2CO2培養(yǎng)箱之CO2濃度、溫度、及水盤是否有污染(水盤的水用無菌水,每周更換)。5.3.無菌操作臺內(nèi)之a(chǎn)irflow壓力,定期更換紫外線燈管及HEPA過濾膜,預(yù)濾網(wǎng)(300小時/預(yù)濾網(wǎng),3000小時/HEPA)。6.水槽可添加消毒劑(Zephrin1:750),定期更換水槽的水

6、粉末培養(yǎng)基配制好后(加了血清),一般在4度盡量不要超過1個月,如在-20度存放時間可長一些,但也不要超過3-4個月,可能對于永生化細胞株來說要求不是太高,細胞嬌弱,放置時間不宜過長。

7、開紫外線照射臺的時候,就將培養(yǎng)基、酶、DHANKS液那到室外讓它自然升溫。這樣40分鐘后,溫度也升上來了。有很多人將他放到37度水浴鍋里加熱。一定要注意水浴鍋的衛(wèi)生,有的常年不清洗,里面很臟,容易在外面瓶身上吸附大量細菌。因此用它的也一定要勤換水。從水浴鍋拿出后,找個毛巾擦干上面的水。

 
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