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禽白血病病毒通用RT-PCR試劑盒說明書

點擊次數(shù):676 發(fā)布時間:2021/7/16
提 供 商: 上海撫生實業(yè)有限公司 資料大?。?/td>
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禽白血病病毒通用探針法熒光定量RT-PCR試劑盒說明書

試劑盒簡介貨為了適應(yīng)禽白血病病毒通用探針法熒光定量RT-PCR試劑盒快速檢測和疫病研究的需要,本公司參照 OIE 國際標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的引物序列,經(jīng)多次實驗及系統(tǒng)優(yōu)化,開發(fā)了本試劑盒。應(yīng)用本試劑盒進(jìn)行檢測具有快速、靈敏、特異、準(zhǔn)確、安全操作簡單、應(yīng)用廣泛和高通量檢測等特點及優(yōu)點。

試劑盒組成及試劑配制:
1.  酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔)。 
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):2瓶(凍干品)。
3. 樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶
4. 生物素標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6. 生物素標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。 
9. 濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。 
10. 終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

樣本處理及要求:
1.血清:全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.  血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3.  組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。
4.  細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

3.樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。

4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

樣本:血清 血漿 組織勻漿等液體樣本 

標(biāo)記物:血清 血漿 組織勻漿等 

應(yīng)用:僅用科研實驗檢測定量,定性檢 

檢測方法:夾心法 

技術(shù)要求:全程按說明書步驟檢測,操作規(guī)范,專業(yè),儀器設(shè)備齊全。

規(guī)格:48t/96t 

性狀:液體 

運(yùn)輸方式:快遞發(fā)貨 

有效期:6個月品

特點:靈敏性高,---性,吸附均勻,吸附性好,回收利用率高,是一款可以讓您放心選購的產(chǎn)品。

使用范圍:此產(chǎn)品供科研實驗使用,不得用于---。

用途:用于測定人血清、血漿、組織及相關(guān)液體樣本中的含量或活性。

注意事項:

1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

2. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

3. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔di一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5. 底物請避光保存。

6. 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)

7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

8.本試劑不同批號組分不得混用。

9.不能使用過期產(chǎn)品。

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。 

注:本公司提供試劑盒免費(fèi)代測服務(wù)。需要其他檢測試劑盒請咨詢銷售人員。

 

 


 
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