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牛結(jié)節(jié)性皮膚?。↙SDV)檢測試劑盒品牌

簡要描述:

牛結(jié)節(jié)性皮膚病(LSDV)檢測試劑盒品牌的相關產(chǎn)品:phospho-PRKCQ(Ser676) 磷酸化蛋白激酶C theta抗體 規(guī)格: 0.1ml
Androgen receptor 雄激素受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
Ron 原基因c-Met相關酪氨酸激酶抗體 規(guī)格: 0.1ml
FGF6 纖維母細胞生因子6抗體 規(guī)格: 0.1ml

更新時間:2022-02-23

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牛結(jié)節(jié)性皮膚?。↙SDV)檢測試劑盒品牌

操作流程:

收集基因信息——>設計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測序——>測序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質(zhì)粒實物保存。

特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

牛結(jié)節(jié)性皮膚?。↙SDV)檢測試劑盒品牌

50T

FS-01H4337

 


操作流程.jpg

 

PCR實驗方法步驟:

方法

1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer

5 μl     dNTP mix (2mM)

4 μl     引物1(10pM)

2 μl     引物2(10pM)

2 μl     Taq酶 (2U/μl)

1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)

1 μl      加ddH2O至 50 μl

產(chǎn)品特點:

◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;

◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;

◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;

◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

實時熒光定量PCR:

實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此,實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎之上的:

1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進入真正的指數(shù)擴增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,得到的Ct值是恒定的。

2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。

外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,重現(xiàn)性定量方法,已得到的*,廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

定量PCR方法:

a、競爭法

選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。

b、內(nèi)參照法

在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物,內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標與靶模板的長度不同,二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內(nèi)標為對照定量待檢測

20248-08-2Α-香樹脂 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg

17659-49-3消旋山莨菪 規(guī)格: 20mg

美司坦 規(guī)格: 100mg

61642-89-5蒼術 規(guī)格: 20mg

枸櫞己定 規(guī)格: 50mg

80154-34-3豆腐果;Helicid 規(guī)格: 100mg

1135-24-63-甲氧基-4-羥基桂 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/vial

64421-28-9山梔甲酯;hanzhiside met 規(guī)格: 20mg

112-63-0亞油甲酯 規(guī)格: HPLC≥98%;100mg

3,5,6,7,8,3,,4’-七甲氧基 規(guī)格: 10mg

牛結(jié)節(jié)性皮膚?。?/span>LSDV)檢測試劑盒品牌C12ORF50  12號染色體開放閱讀框50抗體 規(guī)格: 0.2ml

PGC1 alpha + beta  過氧化物體增物激活受體γ輔激活子1α+β抗體 規(guī)格: 0.2ml

PILR beta  細胞表面受體PILRβ抗體 規(guī)格: 0.2ml

THYN1  胸細胞核1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit Anti-human IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標記的兔抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml

MICA/MHC I  MHC I類鏈相關A/組織相容性復合物1抗體 規(guī)格: 0.1ml

OIF  骨誘導因子抗體 規(guī)格: 0.2mlC-jun/AP-1  原基因/活化1抗體 規(guī)格: 0.1ml

BLAME/SLAMF8  BLAME抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-eIF4EBP1/2/3(Thr36)  磷化4E結(jié)合1,2,3抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-Rb(Ser249)  視網(wǎng)膜母細胞瘤相關1抗體 規(guī)格: 0.1ml

CA I/Carbonic anhydrase 1  碳酐1抗體 規(guī)格: 0.2mlPAICS  磷核糖胺咪唑羧化抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-CDKN2A/P16 (Ser140)  磷化抑基因p16抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-APP/ABPP (Ser730)  磷化APP淀粉樣肽前體抗體 規(guī)格: 0.1ml

使用方法:

一、稀釋標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。

1. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。

3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 DNA 的制備

7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。

8. 如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。

三、設置 qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進行)

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復,則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復,則標記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于PCR 陽性對照。

 


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